【摘要】目的探讨系统性红斑狼疮(sLE)患者外周血白细胞介素(IL)一12、干扰索(1FN)Y分泌水平的变化，以及钙调磷酸酶(cak-neu¨n)拮抗剂对其分泌水平的影响。方法选取L6例未治活动性sLE患者和10名正常人，采集静脉血标本分空白组、脂多糖/植物血凝素(LPs/ljHA)刺激组、PHA/I_Ps+他克莫司(FK506)组及PHA几Ps+环孢素组作体外全血细胞培养，然后应用酶联免疫吸附法(EJIsA)检测培养上清ELN 7分泌水平，经减去血浆基础细胞因子水平后作为该例标本的IL12或IFN-分泌量。结果SLE患者的全血培养细胞IL12及IFN一7的分泌量明显高于正常人，而且sLE患者ILl2及IFN一7分泌水平均与系统性红斑狼疮疾病活动指数(sI上[)AI)呈不同程度的正相关关系;FK506、QA对IlJ-12及IFN y分泌均有显著的抑制作用(P均<0叭)，而且两种药物对SLE患者上述两种细胞因子分泌的抑制作用强度明显大于对正常人的抑制强度。结论 II，12及IFN一7分泌上调在sLE的发病中起重要作用，抑制ILl2及IFN一7的分泌可能是治疗sLE的新措施。钙调磷酸酶拮抗剂FK506、QA培养全血细胞多途径激活后的IL一12及JFN一7分泌具有抑制作用，抑制ILl2及IFN一7的产生可能是钙调磷酸酶拮抗剂治疗sI的机制之一。

　　【关键词】红斑狼疮，系统性;白细胞介素12;干扰索Ⅱ型;环孢菌素

　　系统性红斑狼疮(svsus erythematc，SLE)的发病机制尚不明了，淋巴细胞功能异常、多种细胞因子的分泌平衡失调参与本病的发生和发展，近年来自细胞介素(IL)一12及干扰素～7(IFN一7)等促炎性细胞因子在SLE发病中的作用倍受重视，IFN一7被认为是引起sLE组织损伤的一种极重要效应因子;而IL一12则通过促进ThO细胞向Thl细胞分化和促进IFN—y的分泌而受到重视。钙调磷酸酶(calcineur_n)拮抗剂原来主要用于器官移植抗排斥治疗，近年来，国内外也有不少关于钙调磷酸酶拮抗剂，如他克莫司(FK506)和环孢素(CsA)在sE治疗取得满意疗效的报道。本类药物的抗排斥作用至少部分是通过抑制2及IL 2等致炎细胞因子的分泌起作用，但其抗风湿作用机制尚未明了，推测也可能与抑制某些致病性细胞因子的分泌有关，例如CsA可抑制类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(peripheral b1d6以及关节滑膜成纤维细胞血管内皮生长因子的产生，但FK506、csA对sLE患者外周血II。一12及IFN 7分泌的作用，国内外尚未见文献报道。

　　1资料与方法

　　1.1研究对象

　　1.1.1活动性SLJ组：16例(男性1例，女性例)，年龄15～38岁，平均26.7岁;病程3周～1年，平均4.7个月，全部病例均为我院初诊病人，符合1982年美国风湿病学会(A)制定的诊断标准，且24 h尿蛋白定量(24 h uPQ)≥0.5 g，平均(2.2i1.6)g，参考rdier等_9 J方法：系统性红斑狼疮疾病活动指数(sLEDAI)的积分>9分，平均(18i5)分，16例病人中3例出现肾功能不全(scr>135 urn。l/L)。1.1.2正常对照组：1名(男性2例，女性8例)，年龄20～32岁，平均27.5岁，均为健康志愿者。1.2实验方法1.2.1 细胞培养：抽取晨空腹静脉肝素抗凝血3ml，用含1%灭新生小牛血清、100 ul/nll青霉素和100g/ml链霉素的RPMI 1640培养基对倍稀释、混匀，按每孔1 ml稀释全血种植于24孔平底培养板，设：①空白对照组;②脂多糖直物血凝素(LP/PHA)刺激组;③LPs/PHA+FK506组;④LPs/PHA+csA组;⑤血浆组：取1 m1稀释　1 500 ^nin离心5 m-n取血浆，作为稀释全血血　细胞因子水平的基础值，除血浆组外，其他各孔加入相应药物，使终浓度为FK506 100 ng/nll、csA 1 f/ml(预实验证实这一浓度对细胞因子分泌具有最大的抑制作用，而且saku等报道这一浓度的FK506和csA对培养的外周血单个核细胞DNA的合成和细胞活性均无明显影响)。在5%c0，37℃培养箱中预先孵育1 h，然后于②～④组加入LPs及PHA(终浓度均为5 Mg/h1)，继续孵育24 h，取上清，于一7()℃冰箱保存。FK506购于日本藤泽泽制药有限公司，bA购于瑞士山德士公司。1 2.2培养上清IL 12及IFN 7水平的检测方法：采用酶联免疫吸附法(EIlsA)检测上清IL—12及FN吖水平，人IL一12 P40试剂盒由美国R&D公司提供。标准品及样本均设双孔进行检测，检测过程严格按照各试剂盒说明书进行。1.2 3 IL 12及IFN一7分泌量的确定：为了去除血浆中离体时已存在的细胞因子对IL一12及lFN分泌量的干扰，本试验以各组全血培养细胞上清的IL一12及IFN—y的浓度分别减去血浆组(第5组)II。一12及IFN一7的浓度后的差值作为细胞培养过程中IL—12及IFN一7的分泌量。1.2.4药物对细胞因子抑制率的计算：为说明FK506、cn对正常人和活动性SLE患者全血培养细胞IL一12及IFN一7分泌量的抑制作用强度，本文用如下的公式计算各药物对细胞因子产生的抑制率：抑制率(%)=(1 c药物刺激)×100。药物”代表FK506、(sA组全血培养细胞IL—12及IFN一7分泌量，C刺激代表LPS/PHA刺激组全血培养细胞IL一12及IFN分泌量。1_3统计学处理应用SPSs 100统计软件进行统计分析。数据以表示，根据资料特征，两样本比较采验(独立样本和配对样本f检验)或秩和检验，两个变量间的相关关系应用Pea。n或spearnlan相关分析。

　　2结 果

　　2.1 系统性红斑狼疮患者全血培养细胞lL 12及IFN 分泌的变化：静息情况下正常人及SLE患者的全血培养细胞均有一定程度的IL一12及IFN～7的分泌，而且LPs/PHA对正常人和活动性sLE患者上述两种胞因子的分泌均有强烈的刺激作用。无论是静息条件下还是刺激条件下，sLE患者的全血培养细胞IL一12及IFN一7的分泌量明显高于正常人，见表1。LPsjHA刺激的IL 12及IFN的分泌。如前所述，IL 12及IFNSLE的发生、发展及活动密切相关，所以我们认为抑制两种细胞因子的产生可能是这些药物治疗sLE的重要作用机制之一。更有意义的是本研究还发现FK506、C对经LPs/HA刺激的正常人和活动性sIE患者外周全血培养细胞IL 12及IFN—Y分泌的抑制作用强度存在明显差异，两种药物对活动性sIE的抑制强度显著高于正常人，也即对于处于免疫反应亢进状态的sI正患者，其抗细胞因子分泌的作用更为强大，它们具有促使免疫应答趋向E常基线的作用，因而说明钙调磷酸酶拮抗剂具有极佳的免疫渊节功能。综上所述，IL一12及IFN一7分泌上调在sLE的发病中起重要作用，抑制两细胞因子的分泌可能是sI治疗措施之一。免疫抑制剂FK506和csA对培养全血细胞多途径激活后的I12及IFN 分泌具有抑制作用，抑制IL—i2及IFN 7的产生可能是钙调磷酸酶抑制剂治疗sLE的机制之一。

　                                     　——转自中华风湿病学杂志

　                                          　作者：刘华锋